玻片标本的种类有哪三种
切片、涂片和装片
玻片标本的种类有切片、涂片和装片三种,生物玻片标本根据保存时间可以分为永久玻片和临时玻片两种,切片是用从生物体上切取的薄片制成的,装片是用从生物体上撕取或挑取的少量材料制成的。标本是动物、植物、矿物等实物,经过各种处理,令之可以长久保存,并尽量保持原貌,藉以提供作为展览、示范、教育、鉴定、考证及其它各种研究之用。整体标本通常用来识别植物、鉴定学名、鉴别中草药。
制作三种生物玻片的共同要求是观察到的材料必须薄而透明,是一层细胞,特别是小生物可以直接制成玻片标本。
染色剂对细胞有毒作用。因此,在制作生物玻片时,尽量不要染色,在材料结构对比度较弱时尽量使用毒性较小的染色剂。
玻片的清洗
玻片的清洁将直接影响到制片质量,所以制作玻片标本的第一步是要对载玻片和盖玻片进行清洁处理。
1.1新购买的玻片不能直接使用,要先浸泡于95%酒精中,以去除表面的附着物质,临用前取出,晾干或烘干备用。
1.2使用过的旧玻片,先用肥皂水或洗衣粉水煮沸0.5h,冷却后用软毛刷刷掉脏物,用流水冲洗干净后,置于95%酒精中备用。如果是石蜡切片可先放于二甲苯(可用制片时回收的废弃二甲苯,既避免污染环境又节省实验成本)中浸泡数小时,把封片用的树胶溶解掉,将盖玻片和载玻片分开后,再用肥皂水煮沸。对于很脏的旧玻片可先用洗液浸泡24h(洗液配制:取重铬酸钾50g,加水300ml,加热搅拌溶解,待其冷却后,徐徐注入浓硫酸250ml,边加边搅拌即成,可长期使用),取出用自来水冲洗干净后,置于95%酒精中备用。
2.涂片的制作
2.1取材要快速,避免发生细胞自溶现象;操作要轻巧,防止损伤细胞结构。
2.2涂片要均匀,厚薄要适度,太厚细胞堆叠,太薄细胞过少,都会影响观察。操作时,以在载玻片上涂上淡淡的一层样品为宜。如果样品细胞密度过大,如过浓可用生理盐水稀释后再做涂片。
2.3制作血涂片时,须用双蒸水,否则易引起染料沉淀;Giemsa染液对酸碱度极敏感,当染液偏酸时,红细胞染成红色,偏碱时则染成蓝色,所以最好用pH6.8―7.0的缓冲液来配制染液。
3.装片的制作
3.1在观察动物组织细胞的临时装片时,为保持细胞的正常形态,应根据动物种类的不同使用相应的生理盐水。如哺乳类等温血动物用0.9%生理盐水,两栖类等冷血动物用0.65―0.7%生理盐水,无脊椎动物用0.45%生理盐水,海产无脊椎动物可用过滤海水。
3.2染色可使观察更清楚,除了碘液(碘0.5g、碘化钾1g、水150ml)以外,还可用1%美蓝或甲基绿(0.5%甲基绿100ml,醋酸1ml)染色。
3.3制作半永久装片,可用甘油封片。将固定、染色过的标本放入5%甘油中,用纱布封口,放在阴凉处2―3天,使水分蒸发、甘油变浓后,吸一滴带有标本的甘油于载玻片上,盖上盖玻片。对于怕压、易碎的标本,可在甘油的两边放两根细玻璃丝,再加盖玻片。
3.4制作永久装片,一般用树胶封片。封片前,要先将固定、染色过的标本经各级酒精及两次纯酒精脱水、每级15min,然后用酒精二甲苯等混液、两次纯二甲苯透明各15min。处理小型的浮游生物,在换液时可离心,使其沉淀,便于操作。