Hepes缓冲液怎么配制

化学名：2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonicacid中文名：羟乙基哌嗪乙硫磺酸分子式：C8H18N2O4SHEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力。其最大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值.在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中.大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色.HEPES有些昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制.实际操作中并非如此简单.溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长也是很重要的。HEPES使用方法有两种：(1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌.每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lNNaOH调pH至7.2,滤过除菌后使用.此时HEPES的使用浓度为10mmol/L.(2)亦可配成100x贮存液（lmol/L），使用前取99ml培养液加入lml贮存液，最终应用浓度仍为10mmol/L。lmol/L（100x）HEPES贮存液配制方法:取23.8gHEPES溶于90ml双蒸水中,用lNNaOH调pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,过滤除菌,分装小瓶（2ml/瓶）,4℃或-20℃保存.